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顯微成像時應(yīng)使得樣品的照明是明亮、無眩光，因此，應(yīng)當(dāng)選用合適的光源和照明方式。

根據(jù)光源、樣品和物鏡和成像位置，可簡單分為透射式和反射式顯微成像。

• 透射式：透射式顯微鏡通過透射光來觀察樣品。光線透過樣品后，經(jīng)過物鏡，最終在相機上成像。一般可用于觀察透明或半透明樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞、組織切片等。
• 反射式：通常也可被稱為落射照明。與透射式不同，一般光束會先經(jīng)過物鏡然后匯聚到樣品上，在被樣品反射后再經(jīng)過物鏡，最終在相機上成像。常用于觀察金屬、巖石等不透明樣品的表面結(jié)構(gòu)。

常見的顯微鏡照明方法有臨界照明和科勒照明：

• 臨界照明：光源經(jīng)聚光鏡后直接成像在被檢物體上，光束狹而強。但是光源的像會與被檢物體的平面重合，圖像中會清晰地看到光源的發(fā)光結(jié)構(gòu)，而且照明會具有不均勻性，造成部分區(qū)域明亮，部分區(qū)域暗淡，會直接影響成像的質(zhì)量。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的兩種極簡顯微成像系統(tǒng)均采用的是臨界照明的方法。
• 科勒照明：柯勒照明克服了臨界照明的缺點，具有很好的觀察效果，是一種理想的照明方法?？评照彰鲗⒐庠吹南癯稍谖镧R后表面，實現(xiàn)將觀察面與光源的像分離，聚光鏡將視場光闌成像在觀察面處，通過調(diào)節(jié)可變光闌孔徑值可控制照明視場大小。因此光源本身不會在樣品平面或相機傳感器上成像。樣品平面因而得到均勻照明。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的幾種顯微光譜系統(tǒng)均采用科勒照明的方式，具有極佳的成像效果。

根據(jù)照明光束和顯微鏡中軸的位置可以簡單分為：

• 中心照明：照明光束中軸與顯微鏡光軸在同一直線上。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的緊湊型顯微成像系統(tǒng)、微區(qū)光譜探測系統(tǒng)等顯微系統(tǒng)均采用中心照明的方法。
• 傾斜照明（Oblique Illumination ）：照明光束中軸與顯微鏡光軸呈現(xiàn)一定的角度，光源傾斜地投射到樣品上。采用傾斜照明可以產(chǎn)生偽3D的效果，具有一定的立體感。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的水平式透反射顯微共焦光譜探測系統(tǒng)支持安裝斜射模塊，可以獲得不錯的三維視覺效果。

常見的顯微成像方法有明場（BF）、暗場（DF）、微分干涉對比（DIC）、熒光（FL）、相襯（相差、PH）、偏光（PO）等：

• 明場（Brightfiled）：明場是最基本的顯微觀察方式。樣品直接處于光線的照射下，光束會直接進入到物鏡中，視場是明亮的，樣品在明亮的背景下呈現(xiàn)暗色。作為一種簡單直接的成像技術(shù)，明場不需要進行特殊復(fù)雜的樣品制備，用途廣泛。但是明場一般只能用于與背景反差較大的樣品，且只能獲得對比度較低的成像。尤其對于透明樣品和與背景顏色相近的樣品，無法獲得較多的細(xì)節(jié)。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的幾種顯微光譜系統(tǒng)均支持明場成像方法。

• 暗場（Darkfield）：相比于明場顯微鏡，暗場顯微鏡一般具有更高的對比度，在效果不佳的背景上也能夠輕松觀察標(biāo)本，能夠從成像中獲得更多細(xì)節(jié)。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的立式反射式顯微光譜系統(tǒng)支持暗場成像，其利用環(huán)形光以高入射角投射在樣品上。光束并不直接進入到物鏡中（不直接觀察到照明光線），而是通過樣品的表面散射（反射）進入物鏡，最后成像。由于光線以高入射角投射到樣品上，絕大多數(shù)光線并不會進入物鏡。樣品中的不均勻顆粒和結(jié)構(gòu)會散射光線，這些光線進入物鏡后，可以形成明亮的圖像，而透明樣本的均勻區(qū)域或不透明樣本的平坦表面則會顯得暗淡。暗場適用于觀察在明場下難以觀察到的微小顆粒、細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)等。

• 微分干涉（Differential Interference Contrast）：對于未染色的透明樣品，其明場圖像通常缺乏結(jié)構(gòu)和細(xì)節(jié)，此時可以采用微分干涉對比顯微鏡，其可以產(chǎn)生浮雕效果的圖案，且具有更高的對比度。

  晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的立式透反射顯微共焦光譜系統(tǒng)支持安裝DIC模塊，照明光先經(jīng)過起偏器（線偏振片），在經(jīng)過一個DIC棱鏡后，會產(chǎn)生兩束以不同的方向傳播且偏振方向垂直的線偏振光。光束照射到樣品后，由于樣品不同位置的厚度和折射率不同，會導(dǎo)致兩束光的相位發(fā)生改變。隨后，樣品反射兩束光經(jīng)過物鏡、DIC棱鏡，在重新匯合后，再經(jīng)過檢偏器，最終成像于相機傳感器上。由于兩束偏振光存在相位差，會發(fā)生相長干涉（變亮）和相消干涉（變暗），使得能呈現(xiàn)出對比度更高的樣品細(xì)節(jié)，且能呈現(xiàn)出三維的立體效果。通過移動DIC棱鏡能夠改變光程差，從而能改變背景顏色。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的 采用反射式結(jié)構(gòu)，故只需要一個DIC棱鏡。如采用透射式結(jié)構(gòu)，則需要兩個DIC棱鏡。

• 熒光（Fluorescence）：熒光顯微技術(shù)是一種特殊的光學(xué)顯微技術(shù)，通過讓樣品發(fā)出熒光，來觀察物體形狀即位置分布，在顯微成像有著廣泛的應(yīng)用。晶萃光學(xué)JCOPTIX提供的立式反射顯微光譜系統(tǒng)，采用落射照明，使用紫光作為激發(fā)光源照射樣品，激發(fā)出綠色可見熒光，并通過濾光片濾除激發(fā)光捕獲熒光，最終成像于相機，且能實時監(jiān)測熒光光譜。

• 相差（phase contrast）：在觀察樣品時，樣品會改變衍射光的相位，通常認(rèn)為衍射光和背景光相差四分之一波長。通過改變兩束光的相位差，比如使背景光相位再提前四分之一波長，兩束光相位差為二分之一波長，此時發(fā)生相消干涉，具有高折射率的樣品會在較亮的背景下顯得較暗，被稱為暗對比或者正相位對比。如果使背景光相位也滯后四分之一波長，兩束光相位同步，發(fā)生相長干涉，可以在較暗的背景上形成較亮的圖像，展示出較多的樣品細(xì)節(jié)，稱為亮對比或負(fù)相位對比。